分光光度計是利用物質(zhì)對光吸收性進(jìn)行定性和定量分析的物質(zhì)，已廣泛應(yīng)用于各行各業(yè)，主要用于純度的物質(zhì)檢查、定量分析、結(jié)構(gòu)鑒定。測量結(jié)果中總有可接受或不可接受的誤差。誤差來自測量過程的各個方面。我認(rèn)為主要是從儀器性能和測量條件的選擇兩個方面進(jìn)行的。

1、儀器本身性能帶來的誤差

1.1、復(fù)色光對比耳定律的偏離

比耳定律成立的前提條件是入射光的單色，但精度再高的儀器，即使是雙單色器的可見分光光度計，也只能得到幾乎單色的光，無法獲得純的單色光，它還包含個窄的光帶，與多色光的性質(zhì)。多色光會導(dǎo)致法的正或負(fù)偏差。與固定的狹縫紫外光譜儀的光譜帶寬為1nm、2nm，和可調(diào)狹縫可以0。Inm；可見分光光度計具有帶寬6nm，SNM，或比十納米更。光譜帶寬應(yīng)盡可能小，但隨著光譜分辨率的提高，儀器靈敏度降低，因此在選擇儀器時必須考慮各種條件的影響。當(dāng)溶液濃度小，單色光純凈時，可以假定符合定律。

1.2、雜散光的影響

雜散光是指探測器的其它波長分量在被測波長的光譜帶寬上。其原因有：分光光度計色散元件、反射鏡、透鏡和單色儀、壁塵等。波長波段的分光光度計、單色儀的透光率、光源的輻射強(qiáng)度和探測器的靈敏度都較低，雜散光的影響更為顯著。的雜光分析儀器的上限會導(dǎo)致測量誤差嚴(yán)重，實際工作中，在定量分析中，在或接近的樣品測定吸光度般的吸收峰，如果有雜光波長的分析，樣品的透過率較小，和雜散光大部分通過測量吸收，這是低于實際吸收。

1.3、儀器噪聲對測t的影響

儀器噪聲也是儀器的個重要指標(biāo)，它表征儀器做稀溶液的能力。是疊加在待測量的分析信號中的不需要的信號，掃描100%T和0%T線，可觀察到紫外可見分光光度計的絕對噪聲水平，如果儀器噪聲較大，會掩蓋較小的測量信號，般用噪音的二倍來表示儀器的靈敏度。

1.4、波長和吸光度準(zhǔn)確度

樣品的每個值都是在定的波長下測得的，如果波長誤差很大，測出的值肯定不準(zhǔn)。吸光度準(zhǔn)確度也是用戶對儀器的直接要求，更應(yīng)引起足夠的重視。家計量檢定規(guī)程規(guī)定雙光束紫外可見分光光度計透射比準(zhǔn)確度為A士0.6%, B土1.0%。

2、測量條件的選擇

2.1、參比溶液和溶荊的選擇

上海儀電分析分光光度計的測量實際上是以通過參比池的光強(qiáng)度作為人射光強(qiáng)度來測定試樣的吸光度，先調(diào)節(jié)儀器使透過參比池溶液的吸光度為零，然后讓同束光通過樣品，使得吸光度比較真實地反映待測物質(zhì)的濃度，所以參比溶液的選擇非常重要。如果僅有待測物質(zhì)與顯色劑的反應(yīng)產(chǎn)物有吸收，可用純?nèi)軇┗蛘麴s水作參比溶液。如果顯色劑有顏色，并在測定波長下有吸收，則用顯色劑溶液作參比溶液，所加人顯色劑及其它試劑的量，與試樣中的加入量應(yīng)致。如果樣品中其它組分本身的顏色對測定有干擾，而所用顯色劑沒顏色，則用不加顯色劑的樣品溶液作參比液。

正確選擇合適的溶劑，對提高分析的準(zhǔn)確度起重要作用。為減小溶劑中雜質(zhì)的影響，應(yīng)選擇高純度的溶劑;溶劑應(yīng)不與待測物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng);待測物在溶劑中要有定的溶解度;在測定的波長范圍內(nèi)，溶劑本身沒有吸收，注意常用溶劑的短可用波長;當(dāng)用揮發(fā)性大的溶劑時，測量過程中吸收池應(yīng)加蓋。

2.2、測試波長的選擇

當(dāng)用分光光度計對溶液進(jìn)行測定時，先需要選擇合適的測量波長。選擇的依據(jù)是該被測溶液的吸收曲線。在般情況下，我們總是選擇大吸收波長作為測量波長，這樣可以提高靈敏度。而在有些情況下大吸收峰很尖銳、吸收過大或附近有干擾存在，就不能選大吸收波長，而必須在保證有定靈敏度的情況下，選擇吸收曲線中的其它波長進(jìn)行測定（曲線較平坦處對應(yīng)的波長），以消除干擾。繪制吸收曲線是正確選擇波長的有效手段和方法。

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